愈心痛胶囊对急性心肌缺血犬血浆内皮素和血清一氧化氮的影响
学术成果
摘要
目的：本研究观察了中药复方愈心痛胶囊消化道给药对实验性急性心肌缺血犬血浆内皮素 (ET) 和血清一氧化氮 (NO) 水平及肌酸磷酸激酶 (CPK) 活性的影响。
结果：在犬急性心肌缺血过程中，血清 CPK 活性和血浆 ET 水平均显著增高，血清 NO 水平下降。愈心痛胶囊两个剂量组均可明显抑制实验性犬心肌损伤时 CPK 的溢出和血浆 ET 的过量释放，同时促进 NO 的生成和释放，与盐水对照组比较差异显著 (P<0.05,P<0.01)，从而保护心肌免受缺血性损伤，其作用效果与剂量呈正相关。
关键词：愈心痛胶囊；心肌缺血；内皮素；一氧化氮；肌酸磷酸激酶
材料和方法
1.1 实验动物
选用健康成年犬，雌雄不拘，体重 12-15kg，由中国中医研究院西苑医院动物室提供。随机分为空白对照组 5 只、生理盐水组 5 只、阳性药对照组 5 只 (硫氮革酮)、愈心痛大剂量组 5 只 (生药 2g/kg)、愈心痛小剂量组 5 只 (生药 1g/kg)。
1.2 药品、试剂和仪器
愈心痛胶囊主要由红参、三七等药物组成，其提取干粉 (生药 g/干粉 g) 由吉林敖东制药厂提供。硫氮革酮片 (恬尔心片，上海延安制药厂生产，批号 980502)。氯化钠注射液 (5g/L，石家庄市第四制药厂生产，批号 98091801)。放免药盒购自中国人民解放军总医院 (301 医院)。NO 试剂盒由军事医学科学院提供。CPK 用芬兰产的"KONE"牌选择性化学分析仪测定。
1.3 实验方法
上述实验药物，均在实验前用生理盐水配制成等体积 (5ml/kg) 以备用。动物在戊巴比妥钠 (30mg/kg) 静脉麻醉及人工呼吸条件下，于左侧第四肋间开胸，暴露心脏，做心包吊床，分离并结扎冠状动脉左前降支中点，造成急性实验性心肌缺血模型。结扎冠脉 15min 后，各组经十二指肠给予实验药物或生理盐水，分别于冠脉结扎 15min(药前)、30min、60min、120min、180min(药后 15min、45min、105min、165min) 抽取股静脉血 (每次 5ml)。血立即分离血清，取 0.5ml 上清液，以酶偶联法测定 CPK 活性。余血清置 -20℃保存以备集中检测 NO。采用微盘测定法，应用酶标仪在 550nm 波长下测定样品的吸光值，以亚硝酸钠为标准，按标准曲线计算 NO 含量。另 5ml 血加入含有 EDTA 和抑肽酶的试管中，尽快在 4℃3000r/min 离心 10min，取血浆置 -20℃冰箱中待测 ET。具体测定步骤按试剂盒说明书进行。
结果
2.1 各组给药前后血清 CPK 活性比较
血清 CPK 活性随着冠脉结扎时间的延长逐渐增高，以结扎 15min 时 (给药前) 测量值为对照，生理盐水组给药后 15min、45min、105min、165min 分别增加 15.2%、28.6%、45.8% 及 52.3%，说明心肌有急性损伤。愈心痛大、小剂量组及硫氮革酮组均能明显抑制 CPK 的溢出，使其活性显著低于生理盐水组。
2.2 各组给药前后血浆 ET 水平的影响
随着冠脉结扎时间的延长，生理盐水组血浆 ET 呈上升趋势，60min 达高峰。愈心痛两个剂量组和硫氮革酮组给药后血浆 ET 水平明显下降，大剂量组与硫氮革酮组作用相似，无显著性差异。
2.3 各组给药前后血清 NO 含量比较
生理盐水组随着缺血时间的延长，血清中的 NO 含量明显下降，而硫氮革酮和愈心痛可以逆转这一趋势。硫氮革酮起效较快，30min 血清 NO 含量达到高峰，而愈心痛两个剂量组均在药后 45min 有明显作用，与生理盐水组比较有显著性差异 (P 均<0.05)。
讨论
CPK 广泛存在于细胞胞浆中，尤以心肌细胞为多，当心肌细胞损伤时 CPK 溢出，使其在血清中活性升高，血清 CPK 活性越高，反映心肌损伤程度越重。本实验以 CPK 释放为指标表明：结扎冠状动脉左前降支中点，造成麻醉犬急性心肌损伤的模型是成功的。本实验观察到愈心痛胶囊可明显抑制犬急性心肌损伤时 CPK 的溢出，降低血清 CPK 活性，保护心肌细胞膜。
ET 是由内皮细胞产生的一种作用强烈而持久的血管收缩肽，其过量释放可引起冠状动脉痉挛，心肌缺血坏死，并可加重心肌再灌注损伤。研究证实，缺血缺氧是 ET 大量释放的最主要因素之一。本实验观察到愈心痛胶囊可明显降低麻醉犬急性心肌缺血时血浆 ET 水平，抑制 ET 的释放，从而减轻对血管和心肌组织的损伤作用。
NO 是由内皮细胞释放的一种舒血管因子，持续基础的 NO 释放，对维持心血管系统恒定的舒张状态，调节血压和冠状动脉基础张力，保持心肌血流灌注等有着重要作用。NO 半衰期很短且极不稳定，于有氧环境中，主要而稳定的代谢产物是硝酸盐和亚硝酸盐。本实验观察到愈心痛胶囊可提高犬急性心肌缺血时血清 NO 水平，促进 NO 的生成和释放，从而保护心肌免受缺血性损害。
硫氮革酮是钙拮抗剂，据报道，钙拮抗剂是抑制 ET 缩血管效应的有效药物。综观愈心痛胶囊方中，红参益气扶正，对机体有广泛的调节适应作用，能增强机体抗应激能力，对心肌有耐缺氧和改善心肌灌注的作用；三七散瘀止痛，其主要成分三七总皂甙具有钙拮抗剂样作用，能明显降低心肌耗氧量，改善冠脉循环，从而减轻和延缓缺血引起的损伤过程。诸药合用，功效与硫氮革酮相近。
参考文献
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